VIH

hola chicos!!

Les dejo una info del aislamiento que se puede hacer de VIH algo que se comento en clase

Aislamiento viral

El aislamiento viral es la técnica más específica para el diagnóstico de la infección por VIH-1, resultando particularmente útil en el diagnóstico de infección en pacientes menores de 18 meses de edad, en donde se considera que la presencia de anticuerpos específicos puede ser de origen materno. El cultivo viral también ha sido utilizado ampliamente en estudios de variabilidad genética y en pruebas de sensibilidad fenotípica a diferentes fármacos.

En los individuos infectados con VIH-1, la probabilidad de aislamiento viral está directamente relacionada con el número de células mononucleares infectadas presentes en un momento dado en la muestra sanguínea. Así sujetos en estadios tempranos de la infección, asintomáticos, con nivel de células CD4+ > 500 cel /uL y donde sólo uno de cada 10 ⁴ -10 ⁵ células están infectadas, la probabilidad de aislamiento es baja. En sujetos con SIDA donde uno de cada 10-100 células están infectadas, la probabilidad de aislamiento es de 90% o más.

A pesar de que el cultivo puede ser realizado también a partir de virus presentes en el plasma, el cocultivo de células mononucleares es el más utilizado actualmente. Se utilizan muestras anticoaguladas con EDTA o citrato de sodio, procediéndose a la separación de células mononucleares mediante gradiente de Ficoll-Hypaque. Una vez aisladas, las células son cocultivadas con mononucleares provenientes de un donador sano, las cuales han sido cultivadas en medio RPMI y estimuladas con fitohemaglutinina. La fitohemaglutinina estimula proliferación celular y la expresión de receptores de interleuquina-2 en la superficie celular. Dicha interleucina es añadida al cocultivo celular, el cual se mantiene en medio RPMI y es renovado con nuevas células del donador dos veces por semana.

El cocultivo de mononucleares del paciente con mononucleares de donantes sanos es el método más eficaz para el aislamiento del virus, el cual puede lograrse también mediante cocultivo en líneas celulares inmortalizadas. Este método no requiere adición de interleucina-2, sin embargo, tiene una menor sensibilidad.

La detección de partículas virales o antígenos en el sobrenadante del cultivo es realizado por diferentes métodos: cuantificación del antígeno p24, determinación de la actividad de la TR u observación del efecto citopático viral. Un cultivo positivo es definido como aquel en que se detecta una producción sostenida de antígeno p24. La mayoría de los cultivos de pacientes infectados que no han recibido tratamiento, manifiestan positividad dentro de las primeras tres semanas de incubación. Algunos factores pueden aumentar el tiempo para una determinación positiva del cultivo, entre ellos una carga viral baja ya sea por ser un progresor lento o como resultado del tratamiento antirretroviral, un reducido número en el inóculo inicial de mononucleares, o bien problemas en la calidad de los reactivos o en la realización de la técnica. ³⁰

El cultivo de células mononucleares periféricas es altamente sensible; sin embargo, consume gran cantidad de tiempo y recursos. Algunos estudios han mostrado equivalencia entre el cultivo y la determinación de DNA viral mediante PCR, para el diagnóstico de infección por VIH-1 en lactantes nacidos de madres seropositivas

REFERENCIA

Infección por virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 (VIH-1) en pacientes pediátricos de México

José Guillermo Vázquez Rosales^*
Fortino Solórzano Santos^*
Ma. Teresa Alvarez Muñoz^** Gustavo Sanchez Huerta
Ma. Guadalupe Miranda Novales^*

*Servicio de Infectología del Hospital de Pediatría del Centro Médico Nacional Siglo XXI del Instituto Mexicano del Seguro Social.

**Laboratorio de Virología de la Coordinación de Investigación en Salud del Instituto Mexicano del Seguro Social.

HUGO CASTELAN